安必奇生物近期在抗体测序领域取得了巨大突破，其先进的新一代抗体测序平台可以实现亮氨酸（leucine）和异亮氨酸（isoleucine）的准确鉴别，推动了抗体测序在研究、诊断和治疗方面的突破性科学进展。亮氨酸和异亮氨酸的鉴别一直是抗体从头测序的关键技术难点，安必奇生物基于专有的AbSeq™平台，采用DASS（Database Assisted Shotgun Sequencing）技术实现对亮氨酸和异亮氨酸的准确鉴别，对于抗体测序领域来说是一个巨大的飞跃，并因此能够实现抗体从头测序完全准确。
本技术平台可以在10个工作日内完成目标抗体的测序工作。我们的服务包括可变区测序、可变区和前导序列测序以及重链、轻链、全长测序等内容。同时，AbSeq™平台还可以胜任对不同物种来源的抗体（涵盖小鼠、大鼠、鸡、兔、羊等物种）、多种抗体亚型及抗体形式的测序工作，例如：IgM、荧光偶联抗体、固定化抗体等。安必奇生物多年来致力于为国内外客户提供完全准确的抗体测序服务。
安必奇生物采用DASS（Database Assisted Shotgun Sequencing ) 技术，通过使用先进的质谱仪和强大的数据处理算法，生成大量序列信息，进而运用计算程序对MS/MS光谱从头测序，利用其独特的内部数据挖掘工具保证我们从上万条MS/MS光谱数据中提取目标抗体序列信息。
图1. AbSeq™新一代抗体测序平台的常规工作流程
目前世界上的一些数据库（如NCBI）虽然包含抗体V、J、C片段序列，但是在抗体成熟的过程中，一个B细胞中的抗体基因要经历体细胞突变的过程才会产生高亲和力的成熟抗体。我司独特的计算方法容错率高，并能匹配相应物种的突变肽段，结果准确、可靠。保证每条肽段都会被检测到，而且每一个氨基酸位点都会生成20-27条MS/MS光谱，因此，对于难以测序的高脯氨酸（proline）和精氨酸（arginine）肽段也可实现测量，而且不需要再进行额外的Edman测序来辅助测序。
抗体轻链的 CDR3 区多由胚系基因编码，而重链的CDR3区则由D基因编码。D基因大部分区域由于受到核酸酶及末端转移酶等重组酶的作用而发生基因重排，导致抗体重链CDR区在数据库中无法进行同源比对。一般来说，一个成熟的抗体只有1-4个氨基酸是由D基因编码的，而其他序列都是基因重组排的结果，只能对其进行de novo测序。
通过多种酶切来产生互相重叠肽段的方式，我们可以测得较长的未知氨基酸序列。同时结合高质量的质谱数据域和高效率的数据挖掘算法，使我们对抗体CDR3区域的解读更为准确，终点可以测得数据库中无同源序列的、20 kDa的蛋白。
图2. IMGT gap alignment of V(D)J domain.
传统的抗体测序技术都无法做到全序列覆盖，几乎都得借助部分数据库中的信息。即，实测一部分，预测一部分。而AbSeq™平台可以保证全序列覆盖，对于抗体的可变区更是每个位点至少覆盖5次。通过这样高频度的覆盖，可以充分保证测序结果的精度。
DASS采用质谱软件 PEAKS Mass Spectrometry Software，它比2008年Nature杂志发表的de novo单抗鸟枪法测序（Bandeira et al, 2008）中所用的算法先进，能够对任何抗体的超变区进行准确鉴定。
我们采用高精度的Orbitrap Elite测序仪，其可以突破以往测序技术带来的分辨率低的限制，可以同时匹配3800个肽段。传统技术很难区分分子量接近的氨基酸（如谷氨酰胺和赖氨酸分子量差异仅为0.03D），而DASS则可以克服这些由传统技术带来的短板。DASS技术已经超过MALDI-TOF时间飞行质谱的精度，逐渐成为从事抗体研究和抗体药物研发的科学家们的新宠。
DASS技术通常不受抗体偶联小基团（如FITC、Biotin、Alexa）的影响，虽然较大的蛋白基团（PE、APC）会给测序带来难度，但若提供较高浓度的蛋白仍可成功测序，因为测序质量与提供的样本量相关。
对IgM的测序方法与 IgG 类似，只是需要的样本量更多。由于IgM恒定区被多个聚糖修饰，不能被PNGase F裂解，我们只能保证抗体可变区的完全覆盖。
DASS技术可适用于不同物种来源的抗体及各种抗体形式的测序工作（小鼠、大鼠、仓鼠、骆驼、兔子等；Fab、单链抗体等），尤其适用于鼠源和兔源抗体。目前已经有大于50个来源于仓鼠和羊的抗体也被成功测序。
化学或者生物偶联的抗体也可被成功测序，只是需要的样品量更大。
许多杂交瘤细胞产生2条轻链，其中一条为无义链，AbSeq™平台也可对这些抗体混合物进行测序。
图3. Accurate mass peptide map.
我们对于Leu和Ile的鉴别限定于CDR区，因为框架区残基通常不影响抗体结合特性。
我们可根据客户需求，可选择只测定抗体的轻链、重链或者可变区。另外，偶联的抗体和IgM等少见抗体亚型的测序也都可定制。
技术革新带来的是时间成本的降低，AbSeq™平台的时间花费是传统测序方法的一半以下，在收到样品后，3-10个工作日内即可完成全序列测定。如要求鉴别亮氨酸和异亮氨酸，则需额外的2~3周。
仅需要提供25-100 μg纯化的抗体。
绝大部分被检测抗体的表现与原抗体相当或者更好。
已圆满完成超过1000个单抗测序项目。
可对荧光标记单抗、IgMs、及其他非传统抗体进行测序。
| 服务内容 | 详细说明 | 周期 | 交付标准 | 价格 |
| 定制化抗体测序服务 | 基于DASS技术的全序列覆盖抗体从头测序 | 3-10个工作日； 如要求精确鉴别亮氨酸和异亮氨酸，则需额外的2~3周 | 详细的技术报告，内容包括：
| 询价 |
除抗体测序外，我们还可提供基于DASS技术的蛋白质和酶的测序服务，包括完整的端到端测序，翻译后修饰的鉴定，质量确定，以及N-糖基化位点和人工标记的鉴定等。安必奇生物可以提供包括抗体设计、克隆、从头测序和分析，以及体外优化等的一站式服务以满足您的需求。如果您对我们的测序平台感兴趣或者有相关的需求，请随时联系我们。
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