MicroRNA Agomir/Antagomir作用机制研究

MicroRNA（miRNA）是一类仅由18-25个核苷酸构成的单链RNA小分子，广泛存在于包括人类在内的真核生物基因组中，具有高度的保守性、组织特异性及时序性。这类小的非编码RNA分子是遗传程序中的重要组成部分，位于编码基因的内含子中，也有一部分存在于DNA序列中，通过形成成熟的miRNA发挥转录调控作用。编码miRNA的基因约占植物、蠕虫和脊椎动物中预测基因的0.01-0.05。

MiRNA agomir是一类经特殊化学修饰的miRNA激动剂，miRNA antagomir则是一类经特殊化学修饰的miRNA拮抗剂，二者都适用于细胞实验、动物实验。安必奇生物的技术团队已搭建了microRNA检测平台，专注于各类生物制品的开发与研制；我们时刻关注agomir/antagomir领域的前沿进展，并在细胞和分子水平上提供探究miRNA agomir/ antagomir作用机制的可用方案，以加深对RNA调控方式的理解并开发更具效率的miRNA基序。

• MicroRNA的作用机制

MicroRNA作为非蛋白的新型表达调控因子，对真核生物的基因表达起着重要的调控作用。关于miRNA的功能及作用机制方面的研究更是目前生命科学研究领域的一大热点。不同的研究中陆续提出了一些假说模型，比如翻译起始抑制、翻译起始后抑制、mRNA降解、Processing body（P小体）、Stress Granules（SG）颗粒扣押靶mRNA等来解释miRNA如何抑制靶基因的表达。

通常，miRNA可以通过两种不同的机制起作用：通过切割靶mRNA阻止其表达或是通过阻断编码蛋白的翻译程序。miRNA的完全结合可以指导靶mRNA中单个磷酸二酯键的切割。即使结合是完全互补的，裂解也仅在miRNA的5'末端与在Piwi结构域中带有核酸内切酶的Argonaute蛋白结合时发生。该途径也被称为RNA干扰，是植物miRNA调节基因表达的主要机制。但在动物中，成熟的miRNA仅部分与靶mRNA序列互补，从而使其能够与其它mRNA结合。动物的miRNA不会诱导靶mRNA的裂解，而是会通过阻断编码蛋白质的翻译发挥作用。

• MicroRNA Agomir/Antagomir作用机制研究服务

图1. MicroRNAs的翻译抑制。(Mattes, 2007)

在体内，需要通过功能丧失或是过度表达的策略来研究miRNA指导的基因表达调控效果。近期，miRNA被证明通过一个正向调节过程来控制基因表达，这是基于基因启动子序列与miRNA中5'区域之间的序列互补性来实现的。更复杂的时候，miRNA甚至可以与转录因子协同作用，以控制靶基因在反馈或前馈环中的表达。

越来越多的研究人员已经鉴定出了一类新型的化学工程核苷酸，agomir或antagomir（约21-23核苷酸），来指导基因的特异性表达或沉默。其中，agomir作为miRNA的类似物，可以在细胞中特异性地上调miRNA的表达；而antagomir被设计为具有与mRNA互补的一段序列，在结合后，通过在空间上阻断miRNA与相应位点的结合，起到阻止靶RNA复合物形成而引起降解的目的。

虽然目前对miRNA调控基因表达的根本原因和机制的了解仍然有限，但安必奇生物致力于miRNA表达的分子机制研究，以帮助科研工作者更清楚得挖掘并解释蛋白质编码基因表达的过程。转录调控，包括宿主基因表达的变化和宿主或miRNA基因启动子的甲基化；转录后机制则代表miRNA加工和稳定性的变化。在这里，我们提供一系列研究microRNA agomir/antagomir表达、转录和转录后调控的通用方案。我们的服务方案包括但不限于：

• Quantitative Polymerase Chain Reaction (qPCR)：定量聚合酶链式反应，通过将miRNA agomir/ antagomir和阴性参照转染到细胞中，48-72h后，提取RNA，检测靶点基因的mRNA水平。qPCR可以在PCR期间实时监控目标基因的扩增情况，通过定量计算得到靶分子的含量情况。
• Western Blot (WB)：将miRNA agomir/ antagomir和阴性参照转染到细胞中，48-72h后，裂解细胞进行WB检测通路中靶点蛋白的水平变化及相对含量。我们提供经典的WB检测，用来分析组织匀浆或细胞提取物样品中的特定蛋白质。
• Immunofluorescence (IF)：通过对靶标的荧光染料化学标记，实现在光学显微镜下对分子的可视化观察。
• Sequencing & Statistical Analysis：针对miRNA的测序及分析，我们可以实现样品间miRNA表达差异分析、miRNA表达聚类分析、外显子/内含子注释等；更高阶的方法，包括miRNA靶基因预测、miRNA碱基编辑分析、miRNA调控网络构建等。所有实验都至少重复三次，结果以平均值给出，通常使用T（t≤0.05）检验进行统计分析。客户也可根据自己的研究目的，自由定制分析内容及统计系统，较大效率地利用数据。
• Other Strategies：我们还可以根据客户的需求或是项目内容，提供个性化的定制服务，加速对miRNA作用机制的研究。

同时，安必奇生物的一站式服务可以帮助客户解决以下课题：

针对您感兴趣的细胞通路、行为或现象（miRNA未知），利用高通量手段筛选出相关的miRNA，接着设计相应的agomir/antagomir进行验证；

针对您感兴趣的通路中的基因，鉴定调控它的miRNA。一般流程如下：首先，构建出包含目的基因3’UTR的荧光素酶报告基因；接着，与候选miRNA agomir共转到培养好的细胞中，通过荧光素酶活性检测，分析出miRNA对目的基因的调控作用。

平台特点及优势

1. 安必奇生物高品质、稳定的技术平台、多样化的解决方案可以满足客户在agomir/ antagomir机制研究中的各类需求；
2. 我们的团队在miRNA作用机制研究领域有数十年的经验，可以提供经济、省时、针对性强的服务方案；
3. 时刻跟进您的项目，提供阶段性进展以及全程的完整报告，包含详细的实验流程、数据、图片、结果分析等。

随着科学家对miRNA调节数百种靶基因（超过六成的哺乳动物基因）的表达能力的研究，各个领域对这类小分子的关注也日益增长。我们知道，miRNA介导的基因调控是复杂的，并且它们本身就是复杂调控机制的目标。实际上，miRNA可以在许多生物回路中充当负调节剂或正调节剂，它们通过干扰翻译机制来改变蛋白丰度（不影响靶mRNA）从而下调基因表达或诱导靶mRNA迅速降解。致力于miRNA研究和服务开发，安必奇生物可以为用户提供完善的microRNA agomir/antagomir机制研究解决方案，并通过不断的探索来剖析生物体内复杂的miRNA调控过程。

如果您想知道更多关于microRNA agomir/antagomir的服务信息，请通过热线电话或是E-mail ()与我们联系，我们的技术人员将在24小时内回复您的所有问题及要求。

参考文献:

1. Mattes, J.; et al. Regulation of microRNA by antagomirs. Respir Cell Mol Biol Vol. 2007, 36, 8-12.

热门服务:

• MicroRNA Agomir/Antagomir体外筛选
• MicroRNA Agomir/Antagomir靶向性研究